Sanquin以非營利為基礎(chǔ)在荷蘭提供血液服務(wù)。Sanquin是血液領(lǐng)域的知識研究所，在輸血醫(yī)學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域開展科學(xué)研究，將這些知識應(yīng)用于一系列制藥和診斷服務(wù)的開發(fā)和生產(chǎn)。

sanquin M1551說明書

Peliclass ELISA combikit IgG1 + 2 + 3 + 4

產(chǎn)品規(guī)格

文章編號

M1551

產(chǎn)品組

IgG亞類，Elisa

尺寸

4 x 48孔

技術(shù)

ELISA

血清中人IgG亞類的ELISA檢測試劑盒（EN）

ELISA kit for quantitative determination of human IgG subclasses in serum (en) 

一、導(dǎo)言
人胰島素樣生長因子包括四個亞類：胰島素樣生長因子1、胰島素樣生長因子2、胰島素樣生長因子3和胰島素樣生長因子4。Igg亞類的生物化學(xué)特性
Described Extensively（1-5）.在幾種生物重要功能中，如
抗原識別、補(bǔ)體活化和結(jié)合到細(xì)胞表面受體很多研究都揭示了血清中的異常
IGG亞類水平可能與各種疾病狀態(tài)有關(guān)。特別是選擇性IGG2亞類缺陷的組合
隨著病毒或細(xì)菌感染的易受感染性的增加，已大量記錄在案（4、5）。人胰島素樣生長因子2或胰島素樣生長因子3的低血清水平
報告的患者中有復(fù)發(fā)性上皮和低呼吸道感染。其他人建立了一個非常低的協(xié)會
血清濃度與中肺再生感染（6）子群血清中的異常也有
在自身免疫疾病、神經(jīng)疾病和艾滋病毒感染中觀察到（4）。
二技術(shù)原則
試劑盒英文名稱含有高涂層微粒條紋的試劑盒
禽單克隆抗體，每種抗體的一個亞類人的特異性。測試樣品，校準(zhǔn)和控制將被孵化
在各自的井里。被確定的Igg亞類將被固相結(jié)合，而非邊界Igg被清洗。Next，
過氧化物酶共軛抗人免疫血清添加到每個井中，洗滌后清除了非邊界共軛物。之后
用堿性溶液（ABTS）和H2O2進(jìn)行孵化，用酸性緩沖阻止反應(yīng)。綠色反應(yīng)產(chǎn)品是
在測試樣品中通過吸收和亞類Igg濃度的測定，與參考曲線的價值相對應(yīng)。
測定了IGG亞類控制血清的校準(zhǔn)曲線的有效性和IGG亞類的精度。
決定
根據(jù)WHO 67/97參考材料制備的校準(zhǔn)器確定了校準(zhǔn)器中的IGG亞類水平。茶
Recommended target values of 5.0 g/l for IGG1，2.6 g/l for IGG2，0.4 g/l for IGG3 and 0.5 g/l for IGG4 were used（7）.
三、儲存和穩(wěn)定性
人骨髓細(xì)胞亞綱應(yīng)在2-8°C保持新版本，并可在標(biāo)簽上使用，直至期滿之日為止。
開放后所有部件的穩(wěn)定度為1周，在2-8°C時保存。
運(yùn)輸條件可能不同于儲存條件。
IV.Contents of the KIT
See the table at the beginning of this package insert.
人亞組蛋白含有足夠的反應(yīng)物，用于每個亞組的48個測試，包括校準(zhǔn)器、控制器和布蘭克。
用柱色譜法純化組織培養(yǎng)基中的單克隆抗體（離子交換與親和性）
色譜法校準(zhǔn)與控制是液體的人。
五.安全
本發(fā)明涉及一種含有危險貨物的骨細(xì)胞抑制劑（HOLDS）酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）。

危險象形圖：GHS07
信號詞：警告
危險說明：
H319引起嚴(yán)重的眼睛刺激
預(yù)防說明：
P280佩戴護(hù)目/面部防護(hù)
P264處理后*洗手
P305+P351+P338如果進(jìn)入眼睛：用水小心沖洗幾分鐘。取下隱形眼鏡（如果有且容易取下）
做。繼續(xù)沖洗
p337+p313如果眼睛刺激持續(xù)：請就醫(yī)
六、所需附加材料
稀釋洗滌-稀釋-和基質(zhì)緩沖液的蒸餾水。
-準(zhǔn)確輸送體積的移液裝置。
-培養(yǎng)箱（37±2°C）。
-一個標(biāo)準(zhǔn)的酶聯(lián)免疫吸附洗滌器或一個500毫升的塑料噴水瓶，用于自動或手動清洗條帶。
-用于測量414 nm或405 nm吸光度的標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附測定儀。
日志線性紙。
七。試樣處理
只有血清樣本應(yīng)該被測試。樣品應(yīng)盡可能新鮮或冷凍保存。
使用前應(yīng)手動稀釋樣品（見VLL分析方案）。
八。分析協(xié)議
-將所有試劑置于室溫（18-25°C）并充分混合。避免氣泡或泡沫。
建議對所有樣品、對照品和校準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行一式兩份的測試。
1。微量滴定板
Peliclass人IgG亞類酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒提供了在不同場合使用部分平板的靈活性。
打開塑料袋之前，確定測試所需樣品數(shù)量所需的條帶數(shù)量加上所需的14口井。
用于運(yùn)行校準(zhǔn)器、控件和空白兩份。從板架上拆下不使用的板條，然后重新包裝
含有干燥劑的塑料袋，存放溫度為2-8°C。

2。緩沖液配制
洗滌緩沖液：在950ml蒸餾水中加入洗滌緩沖液濃縮液瓶的總含量，制備洗滌緩沖液。
稀釋的洗滌緩沖液必須在2-8°C下儲存，并保持穩(wěn)定1周。
注：濃縮緩沖液可能含有鹽晶體。在制備工作強(qiáng)度緩沖液之前，將濃縮緩沖液加熱
短暫至37°C以溶解晶體。
稀釋緩沖液：計算所需稀釋緩沖液的數(shù)量（每個微孔條約2毫升未稀釋緩沖液），并制備
工作強(qiáng)度溶液，將緩沖液在蒸餾水中稀釋10倍。
三。校準(zhǔn)品和對照血清的制備
濃度見所附信息傳單的表2和表3。
校準(zhǔn)器：（見隨附信息傳單的表1）用“1:500”標(biāo)記一根10毫升試管，用“1:8”標(biāo)記八根3毫升試管。
分別。
將4.99毫升稀釋緩沖液移到10毫升的試管中，加入10μl的校準(zhǔn)血清（初始稀釋液1:500）。移液管1.9毫升
將標(biāo)有“cal1”和1.0 ml的試管中的稀釋緩沖液倒入標(biāo)有“cal2-cal8”的試管中。
將100μl 1:500稀釋校準(zhǔn)器移液管1，從該管中加入1.0 ml
上一次稀釋到下一個“校準(zhǔn)”管。為每個igg子類選擇校準(zhǔn)器稀釋系列：igg1 1:80000-1:1280000
igg2、igg3和igg4 1:10000-1:160000。
對照組：在一根試管上貼上“1:500”標(biāo)簽，兩根3毫升試管上貼上“1:30000”（用于IGG2、3、4）和“1:240000”（用于IGG1）標(biāo)簽。
管內(nèi)移液管用1:500毫升稀釋緩沖液和10升對照血清標(biāo)記。
移液管內(nèi)貼有1:30000 885μl稀釋緩沖液和15μl 1:500稀釋液的標(biāo)簽。
試管中的移液管標(biāo)記有1:240000 875μl稀釋緩沖液和125μl 1:30000稀釋液。
準(zhǔn)備一管3毫升的稀釋緩沖液作為空白。
4。樣品的制備
稀釋液與對照血清相同的稀釋液稀釋試驗樣品。對于超出給定范圍的結(jié)果
范圍（見隨附信息傳單的表1），應(yīng)使用不同的樣品稀釋液重復(fù)試驗。
5。次洗滌步驟
用洗滌緩沖液洗滌板架上所需的微孔四次。手動清洗時，*注入井內(nèi)（>300
使用洗滌緩沖液并丟棄，重復(fù)此步驟三次。后，井應(yīng)該是*空的。隨后的
應(yīng)立即加入試劑，不要讓井長時間干燥。
6。步孵化
將100微升稀釋的校準(zhǔn)器、對照品、樣品和空白物添加到適當(dāng)?shù)目字小?br />用粘合密封件蓋住板，輕敲微量滴定板邊緣幾秒鐘，輕輕攪拌，以混合每口井的內(nèi)容物。
在37°C下培養(yǎng)1小時。
清洗前，按照第8點所述準(zhǔn)備下一種培養(yǎng)試劑。

7。第二步，洗
吸入supernatant from the the井洗板5在AS點描述的程序辦理。
8。incubation共軛抗體與人IgG HRP—to
dilute by the共軛1∶500µL移液30毫升稀釋14.97 of the共軛到緩沖區(qū)。dilute共軛：繼續(xù)to the
1：3000×1.2毫升移液稀釋1：of the 500毫升稀釋到緩沖區(qū)6。
1：2000×2.0毫升移液稀釋1：of the 500毫升稀釋到緩沖區(qū)6。
1：1000×3.5毫升移液稀釋至1∶500 of the 3.5毫升稀釋緩沖。
of the 100µL：add to the 1:500稀釋抗IgG1的微孔條；
100µL of the 1:3000稀釋to the反IgG2的微孔條；
100µL of the 1:2000稀釋to the IgG3抗微孔條；
100µL of the 1:1000稀釋抗人IgG4 to the微孔條。
覆蓋板與粘接密封茶葉，攻絲模式邊緣輕輕（for a幾秒到the contents of each混合好。
在37°C孵育1小時）。
只是之前洗下incubation試劑準(zhǔn)備在10點和描述的程序辦理。
9。三步洗
吸入supernatant from the the井洗板5在AS點描述的程序辦理。
10。incubation與ABTS底物
底物溶液（calculate the amount of相角近似為0.9毫升的微孔條will be needed）。
equivalents add the solution of 200µL氫過氧化物的股票和股票400µL溶液20 mL of  ABTS的工作強(qiáng)度
底物緩沖液（18底物溶液2毫升+股票distilled毫升水）。
add to 100µL的底物溶液的井。
攻絲模式的邊緣輕輕地大一些microtitreplate for the seconds to the contents of each混合好。
在室溫孵育30分鐘換（18 - 25°C）。
11。停止酶反應(yīng)
50µL add to solution of停在井。
12。板讀取超時
在1小時內(nèi)（閱讀414 preferably）或安在405 nm）的閱讀器。
結(jié)果和解釋（九日。
absorbance at the -記錄（414 preferably for each 405 nm）或平均值和復(fù)制的好茶。
- duplicates should not for each樣品有什么區(qū)別，超過平均值15% from the。如果卵巢duplicates黑莓，should be the法
重復(fù)灌水。
圖- absorbances校準(zhǔn)器（the average of the Y軸）與茶相關(guān)的subclass毫微克/毫升的濃度（X軸）的在線日志線性
適合的擬合曲線和紙畫。
- the levels of the調(diào)控血清IgG subclass should FIPS在范圍（S）表3 of the given在封閉的信息傳單。
the average value for - each absorbances插值曲線上的參考樣品。
測試顯示均值- samples which the range of the“absorbance dilutions參考曲線，appropriately should be稀疏。
- subclass for an評價IgG濃度在測試樣品中出現(xiàn)found the levels，with the values for  normal IgG
subclasses（EEA X參考靶道）。

X.測定范圍
關(guān)于試劑盒特定的分析范圍，請參閱隨附信息傳單的表1。
四
十一。參考范圍
健康高加索個體血清樣品中IgG亞類的參考范圍（G/L）（8）。其他人群分開
應(yīng)獲得參考范圍。

注：
試驗的具體性能特性所引用的值代表典型結(jié)果，不應(yīng)視為規(guī)范。
這個工具包。
十三。限制
1。用戶應(yīng)接受培訓(xùn)，熟悉酶聯(lián)免疫吸附試驗和檢測程序。
2。不應(yīng)使用大量溶血或含脂樣品。對于含有
類風(fēng)濕因子，高膽紅素水平，或其他循環(huán)免疫復(fù)合物。這些樣品應(yīng)采用其他方法進(jìn)行分析。
三。超出范圍的樣品，如副蛋白，應(yīng)使用不同的稀釋液重復(fù)。
4。發(fā)現(xiàn)其中一個IgG亞類的水平降低永遠(yuǎn)不能提供明確的診斷，但應(yīng)該考慮。
作為免疫系統(tǒng)紊亂的跡象，需要進(jìn)一步的診斷調(diào)查。
5。控制血清應(yīng)始終用于檢查校準(zhǔn)曲線的有效性。當(dāng)控件超出范圍時，
試驗樣品不可靠。應(yīng)重復(fù)試驗。
6。不同批次的試劑不能互換。
7。剩余的試劑（如靜容量）不應(yīng)與新開小瓶的內(nèi)容物混合。
8。瓶蓋和小瓶不能互換。應(yīng)更換相應(yīng)小瓶上的瓶蓋。
9。盡管人類校準(zhǔn)品和對照血清已經(jīng)被檢測出特定疾病傳播因子的標(biāo)記物。
根據(jù)歐盟現(xiàn)行的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范指南，所有來源于人類的成分應(yīng)被視為
可能具有傳染性。
10。防腐劑：硫柳汞®0001%。
11。在酶聯(lián)免疫吸附試驗的每個培養(yǎng)/固定步驟中使用新的平板封條，以避免交叉污染。不要使用鋁
箔。
12。每次轉(zhuǎn)移時使用一次性移液管頭，以避免交叉污染。
13。每次使用該試劑盒時，應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)器、共軛物和緩沖器的新稀釋。
14。不要使用與試劑盒一起提供的試劑和微量滴定條。
15。疊氮化納滅活HRP，不使用含疊氮化納的溶液，也不向提供的緩沖液中添加疊氮化納。
16。應(yīng)根據(jù)實驗室規(guī)定進(jìn)行廢物處理。

XIV. 參考

1. Shakib, F. (Editor), Monograph in Allergy, Karger A.G., 19 (1986). 2. Shakib, F. (Editor), The human IgG subclass, Pergamon Press (1990). 3. Vlug, A. et al., Eur. Clin. lab., 8:26 (1989). 4. Jefferis, R. et al Clin.Exp.Immunol. 81:357 (1990). 5. Hamilton, R.C., Clin. Chem., 33:1707 (1987). 6. Beck, C.S. and Heiner, D.C., Am. Rev. Respir. Dis., 124:94 (1981). 7. Klein, F et al., Clin. Chem. Acta., 150 119 (1985) 8. Vlug, A. et al., Ann. Biol. Clin. 52:561-67 (1994). 

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