一、基礎(chǔ)信息

1. 核心產(chǎn)品參數(shù)  

- 貨號：AS-AB18A-100（100μl）、AS-AB18A-300（300μl）  

-英文名：Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名：重組抗Npas4兔單克隆抗體

- 品牌：Activity Signaling

- 宿主與類型：重組兔單克隆抗體，通過基因工程技術(shù)構(gòu)建，避免動物個體差異  

- 形態(tài)與保存：液體形式，1mg/ml濃度溶于PBS，短期4℃保存，長期-20℃分裝凍存  

2. 靶標蛋白Npas4的生物學(xué)意義  

Npas4（Neuronal PAS Domain Protein 4）屬于bHLH-PAS轉(zhuǎn)錄因子家族，是神經(jīng)元活動依賴性的即早基因（IEG）產(chǎn)物。其表達具有高度神經(jīng)元特異性，僅在突觸活動激活后數(shù)分鐘內(nèi)迅速上調(diào)，且持續(xù)時間短暫（約1-2小時），被認為神經(jīng)元活性的黃金標志物。Npas4的核心功能包括：  

- 調(diào)控突觸可塑性：通過激活BDNF等下游基因，平衡興奮性與抑制性突觸（E/I平衡），參與學(xué)習(xí)記憶和恐懼消退。  

- DNA損傷修復(fù)：與NuA4復(fù)合物結(jié)合，在神經(jīng)元活動誘導(dǎo)的DNA斷裂位點募集修復(fù)蛋白，維持基因組穩(wěn)定性，延緩神經(jīng)退行性變。  

- 晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)：與BMAL1等時鐘基因互作，調(diào)控視交叉上核（SCN）對光信號的響應(yīng)。  

- 疾病關(guān)聯(lián)：其異常表達與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關(guān)。  

二、作用原理

1. 抗體設(shè)計與制備  

該抗體通過重組DNA技術(shù)構(gòu)建，具體流程包括：  

- 抗原篩選：以Npas4蛋白C端保守區(qū)域（人源氨基酸597-802）為免疫原，確?？缥锓N識別（小鼠、大鼠、人類）。  

- 單B細胞克?。簭拿庖咄猛庵苎蛛x特異性B細胞，測序獲取抗體可變區(qū)基因。  

- 哺乳動物細胞表達：將抗體基因?qū)際EK293細胞，通過無血清懸浮培養(yǎng)大規(guī)模生產(chǎn)，避免動物源污染。  

- 嚴格純化：經(jīng)Protein A親和層析和SEC分子篩純化，純度>95%，內(nèi)毒素水平<0.1EU/μg。  

2. 作用機制  

抗體通過雙價Fab片段特異性結(jié)合Npas4蛋白的PAS結(jié)構(gòu)域，阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用，從而抑制轉(zhuǎn)錄活性。該結(jié)合具有高度選擇性：  

- 種屬交叉反應(yīng)性：通過小鼠、大鼠及人類腦組織樣本驗證，在WB中均顯示單一87kDa條帶。  

- 亞細胞定位：免疫熒光（IF）實驗證實其與DAPI共定位，提示抗體可穿透細胞核膜，識別內(nèi)源性Npas4。  

- 功能驗證：在Npas4基因敲除（KO）小鼠中無信號，證明抗體無交叉反應(yīng)。

三、實驗痛點解決方案

1. 傳統(tǒng)抗體的局限性  

- 特異性不足：多克隆抗體因識別多個表位，易與PAS家族其他成員（如NPAS1、NPAS3）交叉反應(yīng)，導(dǎo)致WB背景高或IHC假陽性。  

- 批次間差異：雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的小鼠單抗可能因細胞株遺傳漂變，導(dǎo)致不同批次效價波動。  

- 驗證困難：缺乏KO模型驗證的抗體難以排除非特異性結(jié)合，影響實驗結(jié)論可信度。  

2. 本產(chǎn)品的針對性優(yōu)化  

- KO驗證黃金標準：在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無信號，排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應(yīng)。  

- 多應(yīng)用場景適配：支持WB（1:500-1:2000）、IHC（1:100-1:500）、ICC/IF（1:200-1:1000），滿足從分子到組織水平的檢測需求。  

- 即用型設(shè)計：1mg/ml高濃度溶液可直接使用，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。  

- 兼容性擴展：可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯(lián)用，實現(xiàn)多標記神經(jīng)元活動分析。

四、核心優(yōu)勢

1. 特異性與靈敏度的雙重提升  

- 高親和力結(jié)合：通過表面等離子共振（SPR）測定，抗體與Npas4的KD值達10?? M級，可檢測低至0.1ng的重組蛋白。  

- 背景信號抑制：在IHC實驗中，對小鼠睪丸等非表達組織無染色，證明其嚴格的組織特異性。  

2. 批次穩(wěn)定性與生產(chǎn)可靠性  

- 基因?qū)用嬉恢滦裕褐亟M抗體的DNA序列恒定，避免雜交瘤細胞突變導(dǎo)致的批次差異。  

- 規(guī)模化生產(chǎn)能力：哺乳動物細胞培養(yǎng)系統(tǒng)可實現(xiàn)快速擴產(chǎn)，供貨周期短至2周。  

3. 實驗效率優(yōu)化  

- 省時省力：無需預(yù)實驗優(yōu)化稀釋度，推薦起始濃度直接適用于大多數(shù)實驗條件。  

- 兼容多種檢測平臺：與HRP、Alexa Fluor等標記二抗配合，支持化學(xué)發(fā)光、熒光顯微鏡及流式細胞術(shù)。  

4. 應(yīng)用領(lǐng)域擴展  

- 神經(jīng)科學(xué)研究：用于神經(jīng)元活動圖譜繪制、突觸可塑性機制解析及神經(jīng)退行性疾病模型驗證。  

- 藥物研發(fā)：作為靶點驗證工具，評估候選化合物對Npas4通路的調(diào)控作用。  

- 高級成像技術(shù)：與組織透明化試劑盒（如CLARITY）聯(lián)用，實現(xiàn)全腦3D成像。  

五、客戶群體與典型應(yīng)用案例

1. 核心用戶

- 神經(jīng)科學(xué)實驗室：研究突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)退行性疾病的機制。  

- 精神疾病研究機構(gòu)：探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。  

- 藥物研發(fā)企業(yè)：開發(fā)靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。  

- 細胞生物學(xué)實驗室：研究神經(jīng)元活動誘導(dǎo)的基因表達動態(tài)變化。  

2. 代表性實驗方案  

- WB檢測神經(jīng)元激活：  

 - 樣本：小鼠海馬組織裂解液（35μg蛋白/泳道）。  

 - 條件：抗體稀釋1:1000，4℃孵育過夜，HRP標記二抗1:5000，ECL顯影曝光30秒。  

 - 結(jié)果：在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶，KO小鼠無信號。  

- IHC定位Npas4表達：  

 - 樣本：大鼠腦冠狀切片（4%多聚甲醛固定）。  

 - 條件：抗體稀釋1:200，37℃孵育2小時，DAB顯色后蘇木精復(fù)染。  

 - 結(jié)果：特異性染色集中于海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細胞核，背景極低。  

- IF檢測原代神經(jīng)元激活：  

 - 樣本：體外培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元（經(jīng)KCl刺激30分鐘）。  

 - 條件：抗體稀釋1:500，與MAP2抗體共染，Alexa Fluor 488標記二抗，激光共聚焦顯微鏡觀察。  

 - 結(jié)果：Npas4信號與MAP2陽性神經(jīng)元共定位，且刺激組熒光強度顯著高于對照組。

六、訂貨信息與技術(shù)支持

1. 產(chǎn)品規(guī)格與價格  

- 100μl裝：AS-AB18A-100

- 300μl裝：AS-AB18A-300

- 定制服務(wù)：提供HRP、Biotin等標記偶聯(lián)抗體，及大包裝批量采購優(yōu)惠。  

2. 訂購流程  

-供應(yīng)商：上海起發(fā)

七、總結(jié)

Anti-Npas4重組兔單克隆抗體（AS-AB18A系列）憑借重組技術(shù)的精準性、嚴格的KO驗證及多場景兼容性，成為神經(jīng)科學(xué)研究的工具。其高特異性、批次穩(wěn)定性及實驗效率，不僅解決了傳統(tǒng)抗體的痛點，更助力研究者在神經(jīng)元活動機制、神經(jīng)退行性疾病及藥物研發(fā)領(lǐng)域取得突破性進展。選擇該抗體，即選擇了可靠、高效、前沿的實驗解決方案。  

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